Обладает богатейшим собранием рукописей средневековья и эпохи Возрождения. Библиотека, основанная в XV веке папой Николаем V, постоянно пополняется, и в настоящее время её фонды насчитывают около 1 600 000 печатных книг, 150 000 манускриптов, 8 300 инкунабул, более 100 000 гравюр и географических карт, 300 000 монет и медалей. К библиотеке относится Ватиканская школа библиотекарей и лаборатория по реставрации и воспроизведению важных манускриптов

Библиотека считается нейтральной зоной,и члены Ордена Розенкрейц здесь такое же частое явление,как и Орден Золотой Зари